TL1A/DR3细胞筛选模型
发布时间:2024/07/26分类:技术中心来源:6163银河线路检测中心生物
背景
TL1A,亦称为血管内皮生长抑制因子(VEGI)和肿瘤坏死因子超家族成员15(TNFSF15),是人类第9号染色体的TNFSF15基因编码的II型跨膜蛋白。TL1A与TNF家族的其他成员类似,形成由β夹心组成的稳定非共价同源三聚体结构。TL1A最初以膜结合形式(mTL1A)存在,随后在金属蛋白酶切割作用下,以可溶性蛋白(sTL1A)释放行使功能。TL1A在多种免疫细胞中均有表达,如单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、T细胞等。最近的研究表明,TL1A在自身免疫性疾病中异常表达包括类风湿关节炎、炎症性肠病(inflammatory bowel disease, IBD)、牛皮癣、原发性胆汁性肝硬化、系统性狼疮红斑和强直性脊柱炎。
DR3,亦称为TNFRSF25,是肿瘤坏死因子受体超家族的一种细胞因子受体,由TNFRSF25基因编码。在TNFRSF的所有成员中DR3与TNFR1具有最高的同源性。DR3是一种I型跨膜蛋白,也是一种有效的共刺激分子,类似于OX40, 4-1BB和GITR,主要在活化的和抗原刺激的T细胞上表达。DR3蛋白包含四个半胱氨酸残基、两个潜在的N连接糖基化位点、一个跨膜结构域和一个带有死亡结构域 (DD)的细胞质结构域。DR3是TL1A在淋巴内皮细胞的唯一受体。
TL1A/DR3信号通路
在静息的T细胞中,DR3以可溶性形式表达,保护细胞免于凋亡。活化的T细胞表达跨膜DR3。sTL1A结合DR3 (膜结合形式)激活下游信号级联,从而调节免疫反应和炎症。sTL1A/DR3相互作用可触发两种不同的信号通路,分别引起炎症和细胞凋亡。首先,DR3的死亡结构域与细胞质中的适配蛋白TNFR相关死亡结构域蛋白(TRADD)结合,然后招募TNFR相关因子2 (TRAF2)和受体相互作用蛋白1 (RIP1)。这些复合物激活MAPKs (ERK、p38和JNK)、NF-κB和效应激酶PI3K信号传导。最后,激活的信号传导调节促炎基因的表达,参与免疫相关疾病的发生。TRADD结合FAS相关死亡结构域(FADD)和RIP3,激活半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-8 (caspase-8)形成复合物,进一步激活下游caspase通路(如caspase-3和-7),诱导凋亡细胞死亡。当caspase-8活性被阻断时,FADD、RIP3、RIP1与下游效应分子混合谱系激酶结构域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein, MLKL)在磷酸化后形成胞质“坏死体”复合体。然后,MLKL寡聚到细胞膜上,导致坏死性细胞死亡,这是一种伴有强烈炎症的细胞死亡形式。在这个过程中,NF-κB被证明可以诱导细胞凋亡抑制蛋白(c-IAP)的激活,从而介导细胞凋亡的负反馈调节和抑制。事实上,更多的证据表明,sTL1A与DR3的连接优先诱导淋巴细胞的促炎途径而不是凋亡。
TL1A/DR3信号的下游作用包括产生几种关键的因子,如IFN-γ、TNF-α、IL-6和IL-17,以及IL-2、IL-4、IL-13,这些促炎因子表达上调,并可能产生致病作用。
也有文章揭露,在体内通过可溶性TL1A触发DR3可促进抗原特异性CD8(+) T细胞的增殖和积累,以及它们向CTL的分化。此外,DR3也作为记忆性CD8(+) T细胞的共刺激受体,其被触发时会增强内源性抗原特异性记忆CD8(+) T细胞的二次扩增。因此,DR3(TNFRSF25)激动剂,可能潜在地用于增强旨在诱导人类抗肿瘤CD8(+) T细胞的免疫原性从而达到抗肿瘤的作用。目前处于临床I期的抗体药物PTX-35,就是一种用于T细胞扩增的新型TNFRSF25激动剂。PTX-35协同肿瘤抗原负载gp96共刺激CD8+ T细胞激活DC,增强先天性免疫和继发性免疫,从而产生有效的肿瘤杀伤效应细胞和长期记忆。
TL1A/DR3药物研发进展
2023年10月23日,罗氏宣布收购Telavant,获得其在研核心产品TL1A抗体RVT-3101,因此越来越多的药企布局TL1A/DR3药物的研发。目前关于TL1A靶点,在研药物有单抗也有双抗,主要针对克罗恩病、溃疡性结肠炎等IBD疾病。关于DR3靶点,目前就只有PTX-35在研。
TL1A/DR3细胞筛选模型
为助力TL1A/DR3靶点药物研发,6163银河线路检测中心生物分别开发了TL1A/DR3报告基因细胞筛选模型。部分细胞产品验证结果如下:
DR3 Effector Reporter Cell CBP74236
Figure 4. Dose Response of Recombinant Human TL1A in DR3 Effector Reporter Cells (C15).
Figure 5. Inhibition of Recombinant Human TL1A-induced Reporter Activity by hTL1A Neutralization Abs in DR3 Effector Reporter Cells(C15).
Figure 6. Inhibition of Recombinant Human TL1A-induced Reporter Activity by hTL1A Neutralization Abs in DR3 Effector Reporter Cells(C15).
Figure 7. Blocking of hTL1A induced DR3 Effector Reporter Cells (C15) Activity by TL1A Neutralizaiton Abs with TL1A CHO Cells.