HCoV-229E和HCoV-OC43都是在1960年代发现的，多年来一直被公认为引起普通感冒的原因，并在一生中引起频繁的再感染。在成年人中，这些病毒每年占急性呼吸道疾病的 4％至15％，在高峰期高达35％。儿童的年发病率达到8％，最高发病率高达20％。据报道，成人中229E和OC43病毒的感染频率为每年每100人15至25人不等，其中有80％的感染者是先前具有该感染病毒抗体的人。

根据CDC和WHO的介绍，针对HCoV-229E的核酸诊断一般是针对RdRP (RNA-dependent RNA polymerase)、Gene N和Gene E， Gene S更多用于对应药物和疫苗的开发。NCBI收录序列为 NC_002645.1，全长27317bp，基因编码4个结构蛋白：S，M，N和E。

以往针对试剂盒检测限的性能评价，一般是选择体外转录的RNA、或者临床阳性病毒来作为标准品，用于性能评价。但是两者都具有很明显的确定，首先体外转录的RNA，一般是很纯，单一，不涉及提取，不符合临床病毒的微环境，因此必然造成检测灵敏度被高估，这也是存在高概率假阴性的主要原因；再次临床阳性病毒，即使是灭活的病毒，也是存在很大的生物安全隐患，因此要求实验室级别为P3-P4，大部分开发诊断试剂盒单位都不满足改要求，另外临床阳性病毒也是来源很有限，不能被稳定供应，反复用于试剂盒的性能评价。

有病毒的完整包膜结构，有HCoV-229E对应的核酸序列，但是生物安全风险较低的假病毒标准品，完美的克服了选择体外转录的RNA、或者临床阳性病毒来作为标准品的缺点，非常适合用于核酸诊断性能评价的标准品。

构建过程：HCoV-229E基因合成→假病毒包装→纯化→QC检测（ddPCR）

Gene N(1170bp)

• 根据HCoV-229E冠状病毒的特点，选取了ORF1ab/RdRP（RNA-dependent RNA polymerase）、Gene E(envelope protein)、Gene N(nucleocapsid phosphoprotein)合计3个区段的序列，用于假病毒的包装，3个区段很好的表征了HCoV-229E的特征序列；

• 6163银河线路检测中心生物设计了ddPCR体系的引物、探针序列，可不需要构建标准曲线的前提下完成对假病毒的QC拷贝数检测，非常准确表征标准品的拷贝数，而且克服了Q-PCR分析CT值的相对判断标准的不准确性；

• 假病毒标准品，无致病性，可再生，质控方法可靠，批次间稳定，可以长期稳定制备和供应，而且要求实验室生物安全级别为P2，满足很多单位的安全需求。

Gene N: